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水中粪大肠杆菌的论文(我想写一篇大肠杆菌的论文,字数1500左右,应该从那些方

2022-09-23 09:45来源:互联网未知编辑:论文大全

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1.我想写一篇关于大肠杆菌的论文,字数1500左右,应该从那些方面入手

0引言 脆性X综合征(fragile X syndrome, FXS)是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征,有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1(fragile X mental retardation, FMR1)中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生[1-2]. 本实验对编码基因存在于3号染色体[3],能与FMR1 基因5′ز d (CGG)nز3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达,并对其DNA结合活性进行研究. 1材料和方法 1.1材料 大肠杆菌DH5α, BL21( DE3)和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司; 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司;T4 DNA连接酶购自Promega公司; Ni2+زNTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司;链酶亲和素磁珠购自Dynal公司;低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司. 1.2方法 1.2.1表达载体的构建 根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物:CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA,CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列(引物序列下划线部分). PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板,扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL,灭菌去离子水10 μL,10*反应缓冲液2.5 μL,25 mmol/L MgCl2 2.0 μL,DMSO 2.5 μL,4* dNTP混合物(每种2.5 mmol/L)2 μL,CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol,模板3.5 μL(50 ng/μL), Taq DNA(5 μ/μL)聚合酶0.5 μL. 扩增条件:95℃预变性5 min,再94℃ 30 s, 53℃ 1 min,72℃ 1 min循环40次,最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离,用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A,酶切产物电泳后回收,在T4连接酶作用下,目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α,接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落. 1.2.2融合蛋白的诱导表达 将测序正确的重组质粒转入BL21( DE3). 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中, 37℃振荡培养12 h, 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基,37℃振荡培养至对数生长期时,加入IPTG至终浓度1 mmol/L,32℃诱导振荡培养4 h,离心收集菌体,SDSزPAGE分析重组蛋白的表达. 1.2.3蛋白表达形式的分析 取5 mL菌液离心,用500 μL的裂解液(10 mmol/L 咪唑,300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH 8.0)重悬,加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL,冰浴30 min,超声波裂菌,离心后分别将上清和沉淀进行SDSزPAGE分析. 1.2.4融合蛋白的纯化 将1 mL 500 mL/L Ni2+زNTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min,直接过柱. 过柱结束后,用4 mL漂洗液(20 mmol/L 咪唑,300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0),洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用0.5 mL洗脱液(250 mmol/L 咪唑,300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0) 3次洗脱特异结合的目的蛋白,分步收集. 取收集液,进行SDSزPAGE分析. 1.2.5CGGBP1与(CGG)29重复序列双链DNA结合 实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次,除去防腐剂. 1*生物素亲和素结合缓冲液(10 mmol/L TrisزHCl,2 mol/L NaCl,1 mmol/L EDTA,1 g/L Tween 20)15 μL重悬磁珠,各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL(100 ng/μL)生物素化的(CGG)29重复序列双链DNA,另外两组分别加入25 μL(100 ng/μL)非生物素化的(CGG)29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照;三组分别再加入2*生物素亲和素结合缓冲液30 μL,25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后,弃上清. 重复上述步骤3次;加入纯化后CGGBP1(500 μg/mL)15 μL 和2*核酸蛋白结合缓冲液(20 mmol/L HEPES,100 mmol/L NaCl,0.5 mmol/L DTT,100 g/L甘油)20 μL,室温下静置30 min;经磁力吸附后,弃上清;用1*核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次;加三蒸水10 μL,沸水煮10 min,进行SDSزPAGE分析. 2结果 2.1原核表达载体的构建及鉴定 扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳,可观察到一条约504 bp的条带(图1); 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切,pRSET A/CGGBP1分为两个片段,分别为2.9 ku和504 bp(图2),均与预计结果相同. 2.2CGGBP1的表达 用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒,筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的E.coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后,在Mr 约25 000处出现1条表达条带;而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解,离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSزPAGE分析表明,CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中,为可溶性蛋白,上清液中的目标蛋白相对较少(图3). 2.3CGGBP1蛋白纯化 在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游, 插入有连续6个组氨酸的序列 —(His )6 tag. 重组质粒经诱导表达后,(His )6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利用(His )6 。

2.跪求关于大肠杆菌的开题报告及论文

怎么写开题报告呢? 首先要把在准备工作当中搜集的资料整理出来,包括课题名称、课题内容、课题的理论依据、参加人员、组织安排和分工、大概需要的时间、经费的估算等等。

第一是标题的拟定。课题在准备工作中已经确立了,所以开题报告的标题是不成问题的,把你研究的课题直接写上就行了。

比如我曾指导过一组同学对伦教的文化诸如“伦教糕”、伦教木工机械、伦教文物等进行研究,拟定的标题就是“伦教文化研究”。 第二就是内容的撰写。

开题报告的主要内容包括以下几个部分: 一、课题研究的背景。 所谓课题背景,主要指的是为什么要对这个课题进行研究,所以有的课题干脆把这一部分称为“问题的提出”,意思就是说为什么要提出这个问题,或者说提出这个课题。

比如我曾指导的一个课题“伦教文化研究”,背景说明部分里就是说在改革开放的浪潮中,伦教作为珠江三角洲一角,在经济迅速发展的同时,她的文化发展怎么样,有哪些成就,对居民有什么影响,有哪些还要改进的。 当然背景所叙述的内容还有很多,既可以是社会背景,也可以是自然背景。

关键在于我们所确定的课题是什么。 二、课题研究的内容。

课题研究的内容,顾名思义,就是我们的课题要研究的是什么。比如我校黄姝老师的指导的课题“佛山新八景”,课题研究的内容就是:“以佛山新八景为重点,考察佛山历史文化沉淀的昨天、今天、明天,结合佛山经济发展的趋势,拟定开发具有新佛山、新八景、新气象的文化旅游的可行性报告及开发方案。

” 三、课题研究的目的和意义。 课题研究的目的,应该叙述自己在这次研究中想要达到的境地或想要得到的结果。

比如我校叶少珍老师指导的“重走长征路”研究课题,在其研究目标一栏中就是这样叙述的: 1、通过再现长征历程,追忆红军战士的丰功伟绩,对长征概况、长征途中遇到了哪些艰难险阻、什么是长征精神,有更深刻的了解和感悟。 2、通过小组同学间的分工合作、交流、展示、解说,培养合作参与精神和自我展示能力。

3、通过本次活动,使同学的信息技术得到提高,进一步提高信息素养。 四、课题研究的方法。

在“课题研究的方法”这一部分,应该提出本课题组关于解决本课题问题的门路或者说程序等。一般来说,研究性学习的课题研究方法有:实地调查考察法(通过组织学生到所研究的处所实地调查,从而得出结论的方法)、问卷调查法(根据本课题的情况和自己要了解的内容设置一些问题,以问卷的形式向相关人员调查的方法)、人物采访法(直接向有关人员采访,以掌握第一手材料的方法)、文献法(通过查阅各类资料、图表等,分析、比较得出结论)等等。

在课题研究中,应该根据自己课题的实际情况提出相关的课题研究方法,不一定面面俱到,只要实用就行。 五、课题研究的步骤。

课题研究的步骤,当然就是说本课题准备通过哪几步程序来达到研究的目的。所以在这一部分里应该着重思考的问题就是自己的课题大概准备分几步来完成。

一般来说课题研究的基本步骤不外乎是以下几个方面:准备阶段、查阅资料阶段、实地考察阶段、问卷调查阶段、采访阶段、资料的分析整理阶段、对本课题的总结与反思阶段等。 六、课题参与人员及组织分工。

这属于对本课题研究的管理范畴,但也不可忽视。 因为管理不到位,学生不能明确自己的职责,有时就会偷懒或者互相推诿,有时就会做重复劳动。

因此课题参与人员的组织分工是不可少的。最好是把所有的参与研究的学生分成几个小组,每个小组通过民主选举的方式推选出小组长,由小组长负责本小组的任务分派和落实。

然后根据本课题的情况,把相关的研究任务分割成几大部分,一个小组负责一个部分。最后由小组长组织人员汇总和整理。

七、课题的经费估算。 一个课题要开展,必然需要一些经费来启动,所以最后还应该大概地估算一下本课题所需要 的资金是多少,比如搜集资料需要多少钱,实地调查的外出经费,问卷调查的印刷和分发的费用,课题组所要占用的场地费,有些课题还需要购买一些相关的材料,结题报告等资料的印刷费等等。

所谓“大军未动,粮草先行”,没有足够的资金作后盾,课题研究势必举步维艰,捉襟见肘,甚至于半途而废。因此,课题的经费也必须在开题之初就估算好,未雨绸缪,才能真正把本课题的研究做到最好。

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3.水中粪大肠菌群的测定

化妆品检测项目中粪大肠菌群的检测流程:

10g/mL样品+90mL灭菌生理盐水 →10mL+10mL双倍乳糖胆(含中和剂)培养基→粪大肠菌群 44.5℃,48h培养

注:在化妆品检测项目中,如果样品含有油脂性的成分,如精油,在样品前处理中需加入液体石蜡、吐温80、生理盐水进行均质,使样品能够均匀分散开来。

粪大肠菌群又是一个什么样的微生物呢?下面我们来详细介绍下:

大肠菌群:大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。

定义(GB2010):在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。

粪大肠菌群:大肠菌群的一种,又称耐热大肠菌群,培养温度:44.5±0.5℃,粪大肠菌群是化妆品检测项目中必检的微生物项目。

大肠埃希氏菌:((Escherichia. coli )通常称为大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类:

致病性大肠杆菌(EPEC)、

肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、

肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、

肠出血性大肠杆菌(EHEC)、

肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。

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4.关于水污染的论文

水污染及其危害 水体污染的概念 水体是指河流、湖泊、池塘、水库、沼泽、海洋以及地下水 等水的积聚体。

在环境学中,水体不仅包括水本身,还包括了水 中的悬浮物、溶解物质、胶体物质、底质(泥)和水生生物等。应 把它看作完整的生态系统或完整的综合自然体。

水体按其类型不 同可以分成陆地水体和海洋水体以及地表水体和地下水体等。 由于水的比热、蒸发热大,冰冻熔解热也大,因而使水环境 下的温度变化小。

水在4C时密度最大,所以海洋、河流下面不结 冰,便于水的对流,使水中营养物和气体得以流动。水的溶解性 好,事水中生物营养物质的运输者和载体。

水的浮力大,使许多 缺乏硬骨骼作支架的动物生存于水中。在太阳辐射和地球引力的 驱动下,水通过气态、液态、固态转换循环,使大气圈、生物圈 和水圈之间能进行能量和物质交换,从而形成了丰富多变的自然 环境,以及生物与环境的协调机制。

但是,人类的活动使得大量污染物质排入水体。这些污染物 质使水体的物理、化学性质或生物群落组成发生变化,从而降低 了水体的使用价值,这种现象称为水体污染。

由于工业化的兴起 和发展,人类在生物圈中的活动日益加剧,水体污染的现象也日 趋严重。因此,产生了许多公害事件,如日本的水事件和富山事 件都是因水体污染造成的危害。

水体污染的严重后果不仅在于危 及人类身体健康,同时也对工农业生产造成危害。 水体污染源和污染物 根据人类活动的不同形式,可以将水体污染分成下面几种类 型。

(1)工业污染源各种工业生产中所产生的废水排入水体就造成 了工业污染源。不同的工业所产生的工业废水中所含污染物的充 分有很大差异,这是由于各种工业加工的原料不同、工艺过程不 同造成的。

冶金工艺所产生的废水主要有冷却水、洗涤水和冲洗 水等。冷却水中的直接冷却水由于与产品接触,其中含有油、铁 的氧化物、悬浮物等;洗涤水为除尘和净化煤气、烟气用水,其 中含有酚、氰、硫化氰酸盐、硫化物、钾盐、焦油、悬浮物、氧 化铁、石灰、氟化物、硫酸等;冲洗水中含有酸、减、油脂、悬 浮物和锌、锡、镍、铬等。

在上述废水中,以含氰、含酚废水危 害最大。有色冶金工业所排出的废水,多含汞、砷、锡、铬等元 素,是水体中重金属污染物质的来源。

此外,有色冶金遗留的大 量矿渣,经雨水冲洗,流入地表和地下水中成为水体中断污染物 质。轻工业所加工的原料多为农副产品,因此工业废水主要含有 机质,有时还常含有大量的悬浮物质、硫化物和重金属,如汞、 镉、砷等。

化学工业的产品很多,因此化学工业废水的充分也很 复杂,在废水中常含有多种有害、有毒,甚至剧毒物质,如氰、 酚、砷、汞等。有的物质难以降解,但却能通过食物链在生物体 内富集,造成危害,如DDT、多氯联笨等。

此外,化工废水中有的 具有较强的酸度,有的则显较强的减性,PH值不稳定,这些废水 对人体的生态环境,水体中的建筑设施和农作物都有危害,一些 废水中含氮、磷均很高,易造成水体富营养化。有的污染物即使 含量甚微,但通过食物链的物质循环富集,会造成水生动物和人 中毒。

总之,工业污染源向水体制排放大废水具有量大、面广、充 分复杂的特点,是重点解决的污染源。 (2)城市生活污水城市居民聚集地区所产生的生活污水,多为 洗涤水和冲刷器物所产生的污水,因此,主要由一些无毒有机物 ,如糖类、淀粉、纤维素、油脂、蛋白质、尿素等组成。

其中含 氮、磷、硫较高。此外,还伴有各种洗涤剂,这是另一类污染源 ,它们对人体有一定危害。

在生活污水中还含有相当数量的微生 物,其中一些病源体,如病菌、病毒、寄生虫等,都对人的健康 有较大危害。根据部分工业发达国家资料统计,城市生活用水量 大约每人每天150-420升,特大城市为440-820升。

(3)农村污水和灌溉水农村污水和灌溉水是水体污染的主要来 源。由于农田施用化学农药和化肥,灌溉后或经雨水将农药和化 肥带入水体造成农药污染或富营养化。

在污水灌溉区,河流、水 库、地下水都会出现污染,同时也就出现土壤污染、食品污染。 此外,船舶在水域中航行时,会对水域造成污染,其主要污 染物是油,其次还有因洗刷船舶带来的污水以及向水中倾倒废物 等。

在海上,原油泄露也会造成严重的污染。 水污染的危害 水体污染影响工业生产、增大设备腐蚀、影响产品质量,甚 至使生产不能进行下去。

水的污染,又影响人民生活,破坏生态 ,直接危害人的健康,损害很大。 (1)危害人的健康水污染后,通过饮水或食物链,污染物进入 人体,使人急性或慢性中毒。

砷、铬、铵类、笨并(a)芘等,还可 诱发癌症。被寄生虫、病毒或其它致病菌污染的水,会引起多种 传染病和寄生虫病。

重金属污染的水,对人的健康均有危害。被 镉污染的水、食物,人饮食后,会造成肾、骨骼病变,摄入硫酸 镉20毫克,就会造成死亡。

铅造成的中毒,引起贫血,神经错乱 。六价铬有很大毒性,引起皮肤溃疡,还有致癌作用。

饮用含砷 的水,会发生急性或慢性中毒。砷使许多酶受到抑制或失去活性 ,造成机体代谢障碍,皮肤。

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